Estandarización de protocolos para el estudio del canal de calcio TRPV3 en ovocitos de Mus musculus
Autor
Rojas-Escobar, Japhet J.
Carvacho-Contreras, Ingrid
Fecha
2021Resumen
El calcio (Ca2+) es un segundo mensajero universal que está implicado en una serie de procesos celulares relacionados con la homeostasis de las células somáticas y de los gametos, ovocitos y espermios. En el ovario adulto podemos encontrar células germinales en diferentes estadios meióticos, incluyendo ovocitos inmaduros los cuáles presentan un núcleo intracitoplasmático al que se denomina “Germinal Vesicle” (GV). Estos ovocitos se encuentran arrestados en profase I de la
primera división meiótica. Una vez que la hembra alcanza la pubertad, y en repuesta a cambios hormonales, se reanuda la meiosis hasta alcanzar el estadio de metafase II de meiosis II (ovocito MII), fase donde el ovocito es ovulado y se encuentra a la espera de ser fertilizado. Una vez que ocurre la fertilización y se produce la fusión de los gametos, se desencadenan cambios periódicos en las concentraciones intracelulares de Ca2+ (“oscilaciones de Ca2+ “) que son esenciales para la
activación de los ovocitos y el comienzo del desarrollo embrionario. Estas variaciones, como una onda única o como oscilaciones, están presente en todas las especies animales estudiadas. Por otra parte, los flujos de este ión dentro y fuera de las células se llevan a cabo a través de una variedad de bombas, transportadores y canales de Ca2+, los cuales regulan y mantienen una correcta homeostasis iónica, tanto durante la maduración del ovocito como en la fertilización. El canal de
Ca2+ TRPV3, perteneciente a la familia de canales TRP (Transient Receptor Potential), se activa en respuesta a diferentes estímulos como temperatura o compuestos derivados de plantas, y su expresión funcional se ha demostrado en ovocitos MII de ratón. Si bien TRPV3 contribuye el influjo de Ca2+, se desconoce la expresión del gen (Trpv3) en etapas tempranas del desarrollo embrionario. El objetivo de este trabajo fue desarrollar y establecer técnicas para el estudio de la expresión del
gen Trpv3 (mediante RT-PCR) en ovocitos de ratón. Adicionalmente, se revisaron protocolos para la obtención de cigotos y embriones en estadios tempranos de desarrollo mediante fertilización in vitro con el fin de, en estudios posteriores, analizar la expresión de TRPV3 post fertilización. Como resultado se establece la estandarización de protocolos de RT-PCR. El estudio de proteínas responsables de influjos de Ca2+, permitirán desarrollar herramientas biotecnológicas aplicables a
distintas áreas de la fisiología reproductiva.
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